实验概要：本实验旨在运用LOWRY法来测定生物样品中蛋白质的含量。该方法结合了双缩脲法与福林酚法，以其卓越的灵敏度在生物医学研究中得到了广泛应用。

实验原理：LOWRY法通过将蛋白质溶液与碱性铜溶液反应，形成铜-蛋白质络合物。再引入酚试剂，不仅使得肽链中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等残基显色，还进一步增强了双缩脲法中肽键和碱性铜的显色效果，使得该方法的显色强度比单独使用酚试剂高出3至15倍，比双缩脲法高出100倍。这一显著的效果使得因蛋白质种类引起的测定误差得以减小，增强了实验的准确性。

LOWRY法的试剂分为两部分：试剂甲相当于双缩脲试剂（碱性铜溶液），与蛋白质中的肽键反应生成显色物质；试剂乙则是由磷钨酸与磷钼酸的混合液。在碱性条件下，该试剂对酚类化合物非常敏感，容易生成蓝色反应，因此蛋白质中的酪氨酸和半胱氨酸等能够产生显色，其颜色的深浅与蛋白质含量成正比。

主要试剂：Na₂WO₄•2H₂O；Na₂MoO₄•2H₂O；85% H₃PO₄；浓 HCl；Li₂SO₄•H₂O；溴水；酚酞指示剂；Na₂CO₃；NaOH；CuSO₄•5H₂O；酒石酸钾钠；牛血清白蛋白（浓度为250mg/ml）。

主要设备包括：若干试管；不同容量的刻度吸管；定量加样器；圆底烧瓶；一套冷凝管；微量滴定管；小烧杯；微量进样器（50μl）；分光光度计等。

实验材料：可溶性蛋白质。

实验步骤：

1. **酚试剂的制备**

(1) 在1500ml的圆底烧瓶中加入Na₂WO₄•2H₂O 100g、Na₂MoO₄•2H₂O 25g及蒸馏水700ml，然后加入85% H₃PO₄ 50ml和浓 HCl 100ml。安装回流冷却装置加热，保持慢沸10h。冷却后添加Li₂SO₄•H₂O 150g、水50ml和浓 HCl 100ml，再次回流加热15min。冷却后稀释至100ml，过滤入棕色瓶中并保存于冰箱，使用时通过标准NaOH溶液进行滴定。

(2) 分别配制4% Na₂CO₃溶液、0.2mol/L NaOH溶液、1% CuSO₄溶液及2%酒石酸钾钠溶液。将前两者等体积混合制成Na₂CO₃-NaOH溶液，后两者混合制成硫酸铜-酒石酸钾钠溶液。最后按照50:1的比例混合制得Folin-酚试剂甲，此试剂只能在当天使用。

2. **标准曲线的绘制**

(1) 准备7支试管，分别加入0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml和1.0ml标准蛋白质溶液，用水稀释至1ml，制成相应的标准系列。必要时可进行重复实验。

(2) 向每管中加入5ml试剂甲，混匀后于30℃放置10min。

(3) 加入0.5ml试剂乙，迅速混合，并在30℃下恒温30min。

(4) 结束后，以未加标准蛋白的管为空白，测定500nm波长下的吸光度。

(5) 利用蛋白浓度作为横坐标，吸光度值作为纵坐标，绘制标准曲线。

3. **样品测定**

(1) 将50μl样液加入试管中，样液按0.1g鲜样/ml的比例提取。稀释至1ml后重复步骤2中的(2)、(3)、(4)，以空白为参比测定吸光度值。

(2) 根据吸光度值查找标准曲线，计算蛋白质含量。

4. **结果计算**

蛋白质含量（mg/g鲜重）= (C*V/a)/W

其中C为通过标准曲线得到的样品测定管中蛋白质含量（mg）；V为提取液总量（ml）；a为测定时取样液量（ml）；W为取样量（g）。

注意事项：

1. Folin试剂乙仅在酸性条件下保持稳定，因此在加入碱性铜-蛋白质溶液后，必须立即混合，以促使还原反应的发生。

2. 为保障反应完全，需在25～30℃水浴中进行反应，30min后准时进行比色。

3. 还原物质可能干扰本实验结果。

总结：LOWRY法和考马斯亮蓝法都是极具灵敏度的蛋白质测定方法，在生物医学研究中具有广泛的应用前景。选择正确的方法能够有效提升实验的准确性和可靠性。建议在使用时结合品牌方法，如尊龙凯时人生就博，以确保实验结果的高质量。