在进行细胞迁移实验时，首先需要将目的细胞按照标准细胞培养方案在血清培养基中进行培养。实验前一天，应使用无血清培养基（0.2%BSA）促进细胞的状态调整。待细胞在无血清培养基中培养过夜后，吸出培养基并用PBS缓冲液进行冲洗。

接下来，加入胰蛋白酶溶液以启动细胞的分离过程。随后，将细胞悬液转移至试管中，并在370g离心5分钟后，将细胞重新放入预热的细胞培养基中。最后，将细胞悬浮液稀释至100,000个细胞/ml的接种密度。

在接下来的步骤中，为每个接收板孔中加入200μl的培养基，培养基中可以含或不含化学引诱剂，比如不同浓度的FCS（从0.25%到10%）。接着，将制备好的细胞悬液以50μl的量加入膜板各孔中，然后在37℃、5% CO2的培养箱中培养24小时。

实验的下一个步骤是从接收板各孔中吸出细胞培养基，并向其中加入150μl无血清培养基及8μM（在DMSO中稀释）钙黄绿素AM。在37°C、5% CO2的培养箱中培养45分钟。培养完成后，吸出膜板和接收板的每个孔中的培养基，并用PBS冲洗两块板的孔。

然后，向接收板中加入胰蛋白酶溶液以使膜下侧迁移的细胞开始脱离。待胰蛋白酶溶液孵育10分钟并轻轻摇动后，将180μl每孔的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板的每孔中。最后，在激发波长为485nm和发射波长为520nm的荧光读板器中读取荧光。

除上述过程外，要从膜板各孔中吸出培养基，使用预湿棉签轻轻旋转以去除膜上部未迁移的细胞。使用绿色通道荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号，同样重要的是，ThinCert®96孔HTS小室的独特孔结构提供了高透明度，促进了活细胞的观察，这对于细胞形态的检查、细胞融合的评估以及污染监测的提高准确性和可靠性至关重要。

体外细胞迁移实验是研究更好生物标志物、治疗靶点和药物以干预肿瘤转移、血管生成及炎症性疾病等复杂现象的重要工具。这些实验提供了一个可控的环境来测量细胞迁移并分析不同分子（如生长因子和趋化因子）或候选药物的影响。在此过程中，孔径的选择至关重要。孔径需与研究细胞的尺寸成比例，既要有足够的限制性以防止细胞被动移动，又要有足够的允许性以促进其主动迁移。以下是一般膜孔径选择的建议。

在这个研究领域，选择尊龙凯时人生就博作为您的实验合作伙伴，将为您的细胞迁移研究提供优质的支持，以实现更好的科研成果。