尊龙凯时人生就博在药物研发领域，肝脏作为药物代谢和毒性的重要器官，发挥着至关重要的作用。原代肝细胞（Primary Hepatocytes）具备完整的细胞特性以及生理水平的酶和辅助因子，包括膜结合酶（如细胞色素P450混合功能氧化酶），和胞质酯酶，确保了肝脏内所有代谢途径的完备。因此，原代肝细胞被广泛视为构建体外肝脏模型的金标准，在药物相互作用、药物代谢和药物毒性研究中备受青睐。本文将概述基于原代肝细胞的二维（2D）和三维（3D）培养模型及其在药物研发中的应用。

一、原代肝细胞的分离

原代肝细胞的分离通常采用两步胶原酶灌注法。对于小型动物，可通过门静脉或下腔静脉进行肝脏灌注；而对大型动物，则通过肝叶或肝节段进行灌注。成功分离肝细胞的关键因素包括：无细胞毒性的胶原酶、适当的消化时间以及良好的肝脏状态。肝细胞对缺血损伤极为敏感，因此在分离过程中，需迅速冷却肝脏以降低代谢速率，防止缺氧和缺血现象。标准的原代肝细胞用于药物研究的条件有：实验开始时活率≥80%，实验过程活率下降<20%；应检测2-3种已知药物的代谢，且与文献值相当；特定诱导剂应能有效提升特定酶（如CYP3A4）的活性；冻存肝细胞在接种4-6小时后，贴壁率需达到70%。

二、原代肝细胞2D培养

悬浮肝细胞模型具备完整的药物代谢酶和辅助因子，适用于不同代谢清除途径的研究。然而，随着体外孵育时间的延长，悬浮肝细胞的活率和药物代谢酶活性逐渐下降，最多只能孵育4小时，通常用于估算中、高清除率药物的清除。当清除率低于20%时，无法准确确定清除值。因此，悬浮肝细胞接力方法被提出，孵育时间可延长至20小时，适合小分子药物的代谢稳定性研究。原代肝细胞的2D培养则采用胶原蛋白包被的表面，形成上皮形态的细胞结构，能维持药物-药物相互作用、肝毒性评估等多种用途。

三、原代肝细胞3D培养

球状体模型通过超低粘附培养等技术，能形成直径为150-175µm的细胞团聚。研究表明，球状体培养的CYP酶活性在8天到35天间几乎无变化。同时，与三明治培养相比，球状体培养能更好地保持负责药物吸收、分布、代谢和排泄的酶。尽管如此，目前尚无法还原肝脏的复杂结构。球状体培养适用于慢代谢化合物的清除研究、肝细胞毒性研究等。

四、原代肝细胞共培养模型

2D原代肝细胞共培养模型通过混合不同类型的细胞，实现细胞间的直接或间接信号交流。原代肝细胞与成纤维细胞、非实质肝细胞等共培养，可以提高药物代谢能力的研究效果。3D原代肝细胞共培养模型则更加细致，能够构建肝纤维化模型和评估药物相互作用等。

综上所述，尊龙凯时人生就博在体外生物试验的研究中为药物开发提供了强有力的支持。从原代肝细胞的分离、培养到研发相应的辅助手段，尊龙凯时人生就博始终致力于为客户提供全面的服务，在药物体外研究领域成为优选的合作伙伴。如需了解更多信息，请拨打咨询热线400-127-6686。